轉(zhuǎn)染試劑是一種新結(jié)構(gòu)類型的DNA轉(zhuǎn)染試劑。該轉(zhuǎn)染試劑為陽離子聚合物和脂質(zhì)體的雜合體，具有轉(zhuǎn)染效率高、重復(fù)性好、毒性低和穩(wěn)定性的特點(diǎn)，目前該轉(zhuǎn)染試劑為我公司產(chǎn)品。轉(zhuǎn)染試劑用于哺乳動物細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，如腫瘤細(xì)胞系(常見的細(xì)胞有HEK293,CHO,COS-1,COS-7,Hela,NIH3T3等)和原代培養(yǎng)的細(xì)胞以及昆蟲細(xì)胞sf9,sf21等。轉(zhuǎn)染試劑，1.0ml，可用于24孔板轉(zhuǎn)染333次或者6孔板166次轉(zhuǎn)染操作。
轉(zhuǎn)染試劑的使用方法：
1、接種細(xì)胞：
對于貼壁細(xì)胞，轉(zhuǎn)染前18-24 h進(jìn)行鋪板（不含抗生素），使其在轉(zhuǎn)染時的密度大約在80%左右。對于懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)染當(dāng)天，配制EZ Trans-DNA復(fù)合物之前進(jìn)行鋪板，每500 ?L生長培養(yǎng)基中加入4~8×105cells。
2、準(zhǔn)備EZ Trans-DNA復(fù)合物：
a、對于每孔細(xì)胞，將1 μg質(zhì)粒DNA稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基（或者OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基），混勻。
b、對于每孔細(xì)胞，將3 μL EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基（或者OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基），輕輕混勻。
注：無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基是稀釋液，不能使用含血清的培養(yǎng)基進(jìn)行DNA和EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑的稀釋。因為EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過程不能含有血清。
c、將稀釋好的EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中，輕輕混勻。
d、室溫放置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA復(fù)合物。
3、轉(zhuǎn)染細(xì)胞：
a、將上述80 μL EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細(xì)胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動培養(yǎng)皿或輕微振蕩，讓EZ Trans-DNA復(fù)合物分散均勻。
b、在37℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)6-18 h，去除含EZ Trans-DNA復(fù)合物的培養(yǎng)液，更換新的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)至對轉(zhuǎn)入基因表達(dá)分析。
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